Бейне: ПТР өнімін тазартудың мақсаты қандай?
2024 Автор: Miles Stephen | [email protected]. Соңғы өзгертілген: 2023-12-15 23:38
Тазарту а-дан алынған ДНҚ ПТР реакция әдетте төменгі ағынды пайдалану үшін қажет және ферменттерді, нуклеотидтерді, праймерлерді және буфер компоненттерін жоюды жеңілдетеді. Дәстүрлі түрде бұл органикалық экстракция әдістерін, мысалы, фенолхлороформды экстракциялау, содан кейін этанолды тұндыру арқылы жүзеге асырылды.
Сондай-ақ сұрақ туындайды, неліктен ПТР өнімдерін тазарту қажет?
Саған керек ПТР өнімдерін тазарту байланыстырудың сәттілігін оңтайландыру үшін пайдаланылмаған праймерлерден, нуклеотидтерден және ферменттерден құтылу үшін өнім ның ПТР . Кімге тазарту the ПТР өнімдері , өлшемді алып тастау хроматографиясы қолданылады.
Сонымен қатар, ПТР-дан кейін не істеуім керек? Қалпына келтіруді жоғарылату үшін 10-20 мкл TE немесе сумен екі рет ұстағыш шыныаяқты шайыңыз. Финал ПТР реакция құрамында молекулалық биологияның әр түрлі қолданбалары үшін қолданылатын күшейтілген ДНҚ микрограмына дейін болуы мүмкін. Бұл қолданбалар қалдық құрамдас бөліктерге аз немесе азырақ сезімтал болуы мүмкін ПТР реакция қоспасы.
Сондай-ақ, ПТР өнімдерін қалай тазартуға болады?
Қолданылатын классикалық әдістер таза жоғары ПТР өнімдері реттілікке дейін гельдік электрофорез, этанолды тұндыру және баған хроматографиясын қамтиды. Өте тиімді болғанымен, бұл әдістер бірнеше үлгілерді параллельді өңдеу кезінде тез қиынға айналуы және әртүрлі дәрежедегі үлгі жоғалуын көрсетуі мүмкін.
Неліктен ДНҚ тазартылуы керек?
Біз таза жоғары ДНҚ буферлік тұздарды, ферменттерді немесе төменгі ағындағы қолданбаларға әсер етуі мүмкін басқа заттарды жою үшін сулы ерітінділерден. Мысалдарға ПТР реакциясы жатады таза жоғары, таза дейін шектеу дайджест кейін және таза геномдық немесе плазмидадан тұрады ДНҚ жасушалық ақуыздармен/қоқыспен ластанған.
Ұсынылған:
ПТР-да праймерлердің қызметі қандай?
ПТР праймерлері – бір тізбекті ДНҚ-ның (ұзындығы 15-30 нуклеотид) қысқа фрагменттері, олар қызығушылықтың мақсатты аймағын қамтитын ДНҚ тізбегіне қосымша болып табылады. ПТР праймерлерінің мақсаты ДНҚ полимеразасы dNTP қоса алатын «бос» 3'-OH тобын қамтамасыз ету болып табылады
ПТР өнімдерін тазартудың басқа әдістері бар ма?
ПТР тазалауды немесе ПТР нәтижелерін тексеруді қажет ететін қолданбалар үшін әдетте екі әдіс қолданылады: бағанды пайдаланып ПТР өнімін оқшаулау және агароз гелінен гельді тазарту
ПТР үшін қандай реагенттер қажет және олардың әрқайсысының қызметі қандай?
ПТР-да қолданылатын бес негізгі реагент немесе ингредиенттер бар: шаблон ДНҚ, ПТР праймерлер, нуклеотидтер, ПТР буфері және Taq полимераза. Праймерлер әдетте жұпта қолданылады және екі праймер арасындағы ДНҚ ПТР реакциясы кезінде күшейтіледі
ПТР буферінің қызметі қандай?
Бастапқыда жауап берді: ПТР-да буфердің рөлі қандай? Әдетте, буфер - бұл аз мөлшерде қосылған қышқылдық немесе негіздік қосылыстарды химиялық бейтараптандыру арқылы рН өзгерістеріне төтеп бере алатын ерітінді, осылайша ортаның жалпы рН деңгейін сақтайды. Бұл ПТР үшін не үшін қажет? ДНҚ рН-сезімтал
ДНҚ типтеуде ПТР рөлі қандай?
ПТР – медициналық және биологиялық зерттеу зертханаларында қолданылатын кең таралған құрал. Ол секвенирлеу үшін ДНҚ өңдеудің ерте кезеңдерінде, инфекция кезінде патогендерді анықтауға көмектесетін геннің бар немесе жоқтығын анықтау үшін және ДНҚ-ның кішкентай үлгілерінен сот-медициналық ДНҚ профильдерін жасау кезінде қолданылады