Лигацияны түрлендіру қанша тұрады?
Лигацияны түрлендіру қанша тұрады?

Бейне: Лигацияны түрлендіру қанша тұрады?

Бейне: Лигацияны түрлендіру қанша тұрады?
Бейне: What Happened To Texan Embassies? 2024, Қараша
Anonim

Трансформация . 1-5 мкл арасында қосыңыз байлау үшін құзыретті жасушаларға қоспасы түрлендіру . Ұзартылған байлау PEG көмегімен ішке түсуге әкеледі түрлендіру тиімділік (жылдам Лигация Жинақ). Электропорация үлкен конструкциялар үшін ұсынылады (>10,000 бит).

Мұнда трансформация үшін қанша байлау өнімі қажет?

Трансформация . 1-5 мкл арасында қосыңыз байлау үшін құзыретті жасушаларға қоспасы түрлендіру . Ұзартылған байлау PEG көмегімен ішке түсуге әкеледі түрлендіру тиімділік (жылдам Лигация Жинақ). Электропорация үлкен конструкциялар үшін ұсынылады (>10,000 бит).

Содан кейін сұрақ туындайды, Лигация және трансформация дегеніміз не? Әдеттегі клондау экспериментінде зерттеушілер алдымен ДНҚ-ның бір бөлігін, мысалы генді ДНҚ-ның плазмида деп аталатын дөңгелек бөлігіне енгізеді. Бұл қадам рестрикциялық ферменттер мен ДНҚ лигазасын пайдаланады және а деп аталады байлау . Кейін а байлау , келесі қадам деп аталатын процесте ДНҚ-ны бактерияларға тасымалдау түрлендіру.

Кейіннен, байлау үшін қанша ДНҚ қажет деген сұрақ туындауы мүмкін.

Тиімді болу үшін вектор + кірістірудің жалпы концентрациясы 1-10 Μг/мл аралығында болуы керек байлау . Вектор: 1:1 және 1:10 арасындағы молярлық қатынасты енгізу ұсынылады (1:3 әдеттегі). Өзіңізге сенімді болмасаңыз ДНҚ концентрациялары, әртүрлі арақатынастары бар бірнеше байлауды орындаңыз.

Лигация реакциясын қанша уақыт сақтауға болады?

Лигациялар мүмкін бөлме температурасында немесе салқын жерде (12-16°C деп ойлаңыз) түнде немесе тіпті бірнеше күн бойы орындаңыз, Егер де сен шынымен бос емеспіз. Сен істей аласың сондай-ақ байлауды сақтаңыз тоңазытқышқа салып, бөлме температурасында байлауды жалғастыру үшін кейінірек шығарыңыз ұзақ қажетінше.

Ұсынылған: