Спектрофотометр көмегімен ДНҚ концентрациясы қалай есептеледі?
Спектрофотометр көмегімен ДНҚ концентрациясы қалай есептеледі?

Бейне: Спектрофотометр көмегімен ДНҚ концентрациясы қалай есептеледі?

Бейне: Спектрофотометр көмегімен ДНҚ концентрациясы қалай есептеледі?
Бейне: Биологиалық нысандарда нәруыздың болуы 2024, Қараша
Anonim

ДНҚ концентрациясы болып табылады бойынша бағаланады абсорбцияны 260 нм-де өлшеу, А260 бұлыңғырлықты өлшеу ( арқылы өлшенеді 320нм-де сіңіру), көбейту бойынша сұйылту коэффициенті және қолдану қатынас, бұл А260 1,0 = 50 мкг/мл таза dsDNA.

Адамдар да сұрайды, ДНҚ концентрациясы мен тазалығын қалай табуға болады?

Бағалау үшін ДНҚ тазалығы , басқа ықтимал ластаушы заттарды анықтау үшін 230 нм-ден 320 нм-ге дейінгі сіңіру қабілетін өлшеңіз. Ең ортақ тазалығын есептеу 260 нм-дегі жұту қабілетінің 280 нм-дегі көрсеткішке бөлінген қатынасы. Жақсы сапалы ДНҚ А болады260280 қатынасы 1,7–2,0.

Сол сияқты, жақсы ДНҚ концентрациясы дегеніміз не? А жақсы сапасы ДНҚ үлгіде А болуы керек260280 қатынасы 1,7-2,0 және A260230 қатынасы 1,5-тен жоғары, бірақ әртүрлі әдістердің осы ластаушы заттарға сезімталдығы әртүрлі болғандықтан, бұл мәндер үлгінің тазалығына нұсқау ретінде ғана қабылдануы керек.

Осыған байланысты NanoDrop ДНҚ концентрациясын қалай есептейді?

Сіз 260 нм жұтылу мәнін тұрақты коэффициентке көбейтесіз (бұл 50 үшін ДНҚ ) және сіз аласыз ДНҚ концентрациясы . Воила. (Жарайды, бұл техникалық тұрғыдан 50-ге көбейтілген қалыңдығы 10 мм үлгідегі A260; NanoDrop A260 стандартты кюветадағы сияқты үлгінің қалыңдығы 10 мм болатындай көрсетеді).

Неліктен бізге ДНҚ-ның сандық мөлшерін анықтау үшін спектрофотометрді пайдалану керек болды?

А спектрофотометр болып табылады нуклеин қышқылдарының орташа концентрациясын анықтай алады ДНҚ немесе қоспада болатын РНҚ, сондай-ақ олардың тазалығы. Қолдану Сыра-Ламберт заңы болып табылады жұтылатын жарық мөлшерін жұтатын молекуланың концентрациясымен байланыстыруға болады.

Ұсынылған: